膠體金免疫層讀卡儀的功能和原理

膠體金免疫層讀卡儀的功能和原理

膠體金（colloidal gold）是氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，金離子還原后聚合成的一定大小的金顆粒，它由一個基礎(chǔ)的晶核（11個金原子形成的二十面體）和包圍在外的雙離子層構(gòu)成（內(nèi)層為負(fù)離子層AuCl2-,外層是帶正電荷的H+）。由于靜電作用，金顆粒之間相互排斥而懸浮成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，故稱膠體金。

 

膠體金具有高電子密度，能與多種生物大分子結(jié)合，已成為繼熒光素、放射性同位素和酶之后，在免疫標(biāo)記技術(shù)中較常用的一種非放射性示蹤劑。膠體金的粒徑一般在1-100nm之間，能夠均勻、穩(wěn)定地分散在液體中，呈球形小顆粒或橢圓形大顆粒。膠體金顆粒外層可以吸附大量的正離子，能夠均勻分散在溶液中。由于膠體金表面呈負(fù)電性，能夠與表面帶正電荷的抗原、抗體通過靜電作用進(jìn)行標(biāo)記。

 

膠體金免疫層讀卡儀可以檢測血凝法、酶聯(lián)免疫法、膠體金法制成的獸藥、瘦肉精、抗生素、動物疫病等快速檢測卡;金標(biāo)讀卡儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)院學(xué)校、養(yǎng)殖場、屠宰場、肉產(chǎn)品深加工企業(yè)、檢驗檢疫等單位的食用。傳統(tǒng)的金標(biāo)診斷試劑，主要通過目測觀察來判斷檢驗結(jié)果，只能用于定性檢測，而且受人為因素影響較大，檢測結(jié)果無法進(jìn)行數(shù)據(jù)保存，不便于追蹤溯源和歷史記錄的查詢，膠體金免疫層讀卡儀可以讀取檢測卡量化的結(jié)果值，取代了傳統(tǒng)肉眼觀察結(jié)果的方式，使得檢測結(jié)果更加的精準(zhǔn)，客觀，穩(wěn)定。



膠體金法檢測原理

 

將特異性的抗體以條帶狀固定在膜上（T線），膠體金標(biāo)記試劑吸附在結(jié)合上（金墊），當(dāng)待檢抗原加到試紙條一端的樣本墊上后，樣本通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。

 

膠體金技術(shù)優(yōu)勢與不足

優(yōu)勢

快速：所有反應(yīng)能在15分鐘內(nèi)完成；

操作簡便：便于個人自測或醫(yī)院檢測；

成本低：不需要特殊的儀器設(shè)備；

穩(wěn)定性好：試劑效期可達(dá)兩年或更長時間；

 

缺點

較ELISA、化學(xué)發(fā)光等方法靈敏度低；

易出現(xiàn)假陽性、假陰性；

存在HOOK效應(yīng)；

膠體金試劑條組成

膠體金試紙條主要由樣品墊、金墊、硝酸纖維素膜（NC膜）、吸水紙4個部分組成，從上至下依次首尾互相銜接，粘貼在PVC底板上。

 

作用

a. 樣品墊：檢測樣本滴加位置，對檢測樣本具有一定的過濾和緩沖作用，降低樣本中離子強(qiáng)度或酸堿度對檢測結(jié)果的干擾。

b. 金墊：將膠體金標(biāo)記抗體通過干燥固定在玻璃纖維素膜上，是追蹤抗體與抗原的反應(yīng)。

c. 硝酸纖維素膜：膜上預(yù)先包被上檢測線和質(zhì)控線，能夠與膠體金標(biāo)記物發(fā)生免疫反應(yīng)相結(jié)合，使膠體金在檢測線發(fā)生聚集，根據(jù)檢測線的顯色狀況進(jìn)行判讀結(jié)果。

d. 吸水墊：通過吸水作用使液體樣品向上流動，帶動金墊的金標(biāo)抗體向上移動，從而與檢測線的抗原發(fā)生反應(yīng)。